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收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。

产物名称

名称    小鼠神经少突胶质前体细胞

2.组织来源：脑组织

3.产物规格：5×105肠别濒濒蝉/罢25细胞培养瓶

4.细胞介绍：

小鼠神经少突胶质前体细胞分离自脑皮层组织；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。少突胶质细胞分布于中枢神经系统，在银浸染标本中，少突胶质细胞比星状胶质细胞小，其突起也较小而少，呈珠状，故被称为少突胶质细胞或寡突胶质细胞。少突胶质细胞（oligodendrocyte）是中枢神经系统（CNS）的成髓鞘神经胶质细胞，其发育要经历少突胶质细胞祖细胞、前少突胶质细胞祖细胞、未成熟和成熟少突胶质细胞等阶段。有学者将少突胶质细胞按其发育程度和形态分为叁型。但是，细胞发育是一个连续的过程，其形态、表达产物和功能的演变没有严格的界限，因此，其分类是相对的。这叁型分别为：Ⅰ型少突胶质细胞又称前O2A（pre-O2A progenitor cell）。细胞呈圆形，表面光滑，直径约3μ尘，体外混合培养时成簇生长在星形胶质表面，具有很强的分裂增殖潜力，表达神经节苷脂GM1、波形蛋白和多唾液酸—神经粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突胶质细胞胞体常有双极或叁极突起，极少数为单极突起，直径约7μ尘，有一定的分裂增殖能力。体外培养时为双潜能细胞，既可分化为少突胶质细胞又可分化为Ⅱ型星形胶质，故又称为少突胶质细胞-Ⅱ型星形胶质祖细胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表达GM1和波形蛋白外还表达神经节苷脂GD3和GQ（淋巴杂交瘤株A2B5产生GQ的抗体），故常用A2B5抗体标记O2A。Ⅲ型少突胶质细胞不再具有分裂增殖能力，为分裂终期细胞。直径约10μ尘。根据其形成髓鞘的能力，又分为不成熟的和成熟的两类少突胶质细胞。不成熟的OL胞体常伸出4～5条较粗大突起，表面还残留有A2B5标记物，同时也表达O1-O4抗原，无形成髓鞘的能力。成熟的少突胶质细胞突起有如蜘蛛网，大量表达半乳糖脑苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有对轴突髓鞘化的能力。体外培养的少突胶质细胞前体细胞（简称少突胶质细胞前体细胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突胶质细胞，前两者具有增殖能力。

5.方法介绍：

实验室分离的小鼠神经少突胶质细胞采用胰蛋白酶消化、混合细胞营养缺失培养、摇床振荡结合差速贴壁法并通过专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×105肠别濒濒蝉/瓶。

6.质量检测：

实验室分离的小鼠神经少突胶质前体细胞经A2B5免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

包被条件PLL（0.1mg/ml）

培养基含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

产物货号CM-M308

换液频率每2天半量换液1次

生长特性贴壁

细胞形态双极、多极形

传代特性不传代，不增值，存活1-2周

消化液0.25%胰蛋白酶

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

产物特点:

1、 使用方便:不需昂贵设备。

2、 可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。

3、 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。

4、 采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。

5、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

6、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

7、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。

细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

一、冻存时的注意事项：

1. 在冷冻保存之前，应观察细胞生长是否良好(log phase) 且存活率高，冻存的细胞密度为80 – 90 ％最佳

2. 冷冻前检测细胞是否保有其*性质，例如是否有杂细胞或者支原体等。

3. 使用的DMSO 应为试剂级等级，以5~10 ml 小体积分装，4 度避光保存，勿作多次解冻。使用的甘油也应为试剂级等级，以高压蒸汽

灭菌后避光保存。在开启后一年内使用，因长期储存后对细胞会有毒性。

4. 冷冻保存的细胞浓度：

4-1. 正常的成纤维细胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 杂交瘤细胞: 1~3 x 10^6 cells/ml，细胞浓度不要太高，某些杂交瘤会因冷冻浓度太高而在解冻24 小时后。

4-3.贴壁肿瘤细胞: 1 x 10^6，依细胞种类而异。腺癌类的细胞解冻后须较高之浓度，而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 悬浮细胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴类细胞须至少5 x 10^6 cells/ml。

5. 冷冻保护剂浓度为5 %或10 ％ DMSO，若是不确定细胞之冷冻条件，在做冷冻保存之同时，亦应作一个backup culture，以防止冷冻失败。