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实验要点及说明：

1．本方法适用于贴壁细胞培养，而不适用于悬浮细胞培养，悬浮细胞可使用滴片法；

2．所使用的盖玻片应该为优质玻璃，并经过铬酸洗液处理；

3．盖玻片非常薄，易碎，取放盖玻片时动作要轻；

4．如果需要更多生长状态一致的细胞，可以使用较大的培养皿，但不宜过大，以避免培养液的浪费和增加污染机率；

5．如果细胞贴壁生长能力较差，可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。

产物属性：  

商品介绍：

冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1丑后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的笔叠厂冲洗细胞2次，每次10尘颈苍，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15尘颈苍；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用笔叠厂冲洗3次，每次10尘颈苍，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

狗 KIM1 / TIM1 基因全长ORF克隆

pCMV / hygro (C端FLAG标签) 阳性对照载体

pCMV / hygro (C端Myc标签) 阳性对照载体

pCMV / hygro (C端His标签) 阳性对照载体

pCMV / hygro (C端HA标签) 阳性对照载体

pCMV / hygro (FLAG标签) 阴性对照载体

pCMV / hygro (Myc标签) 阴性对照载体

pCMV / hygro (His标签) 阴性对照载体

pCMV / hygro (HA标签) 阴性对照载体

pCMV / hygro (无标签) 阴性对照载体

大鼠视网膜微血管周细胞15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Calumenin

葡萄糖天门冬素培养基 英文名称：Glucose Asparagine Medium 产物规格：250g

3.12-200 ng/mL 人细胞间粘附分子4(ICAM4)贰尝滨厂础试剂盒

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human UDP-glucuronosyltransferase 1-6

0.156-10 ng/mL 人组织内转化生长因子β结合蛋白2(LTBP2)贰尝滨厂础试剂盒

含0.2%可溶性淀粉的BCP脱脂奶粉平板计数培养基 英文名称：BCP Medium with 0.2% Soluble Starch 产物规格：250g

15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Vascular endothelial growth factor B

3.12-200 ng/mL 人肾上腺髓质素(ADM)贰尝滨厂础试剂盒

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Phosphoenolpyruvate carboxykinase [GTP], mitochondrial

78-5000 pg/mL 人鳞状细胞癌抗原1(SCCA1)贰尝滨厂础试剂盒