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人原代肝实质细胞专用培养基

人原代肝实质细胞培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产物可保持人原代肝实质细胞优良的生长状态。

本产物中已包含人原代肝实质细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人原代肝实质细胞的培养。

注意事项

仅限科研用。

培养体系中的一些组分是对人体健康有害的物质，请不要用暴露的皮肤接触培养体系的液体和有培养体系的液体残留的容器内部；这部分有害物质的浓度和危害性都较低，如有接触，立即用自来水冲洗即可。

复苏

1) 将恒温水浴锅中的水预热到 37℃；

2) 准备一支 15ml 离心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培养基，放入 37℃水浴锅中预热；

3) 戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中

复温晃动冻存管以提高复温速率；

4) 将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min；

5) 准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4ml 培养基；

6) 离心完成后弃去上清，用 1ml 培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入

CO2 培养箱中培养静置。

传代 （细胞传代建议一传二）

1) 当细胞汇合度达到 85%以上时，可进行传代。

2) 在生物安全柜内，打开培养瓶瓶口，收集瓶内的培养基；

3) 向培养瓶内加入 3ml 无菌的 1×PBS 后，水平放置培养瓶，使PBS 能够浸润到培养瓶底面上所有的面积，吸弃 PBS；

4) 向瓶内加入消化液 1ml，浸润底面后放入 37℃ CO2培养箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起，若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml 含 10%FBS 的培养基中，将悬液吸入 15ml 离心管；

① 准备一个无菌的 15ml 离心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培养基；

② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和（避免吹打③）；向之前消化的培养瓶中加入 1ml 继续消化 2min 左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱。

6) 1000rpm 离心 5min；

7) 准备两个新的 T-25 培养瓶，各加入 4ml培养基。

8) 离心完成后，弃上清，用 2ml 培养基重悬离心细胞，将重悬后的细胞转入 2 个 T-25 培养瓶，每个培养瓶各 1ml；

9) 水平放置培养瓶，震荡混匀后，将培养瓶置于 37℃，5%CO2培养箱中静置培养。 

冻存 （细胞冻存建议每瓶 T25 冻一支）

1）词6）参照传代步骤

7）离心完成后，弃上清，用 1mL 冻存液重悬细胞沉淀，然后转入 1.8ml 冻存管中；

8）将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中，之后转入-80℃冰箱中过夜降温；

9）第二天，取出降温完成的序降温盒中的冻存管，尽快转入液氮罐中保存。

cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif 0.5mgcx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1) 趋化因子(C-X3-C 基元)配体1抗原

COLGALT2 Protein Human 重组人 GLT25D2 蛋白

CSF2重组大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 标签) Protein

VSIG4 Protein Mouse 重组小鼠 VSIG4 蛋白

LGALS3重组人 Galectin-3 / LGALS3 蛋白 Protein

大鼠β防御素(β-Defensin)试剂盒 ，英文名： β-Defensin ELISA Kit

Mouse thyroopin releasing hormone (H) ELISA Kit 小鼠促甲状腺素释放激素(H)试剂盒

ELISA 小鼠8-羟基脱氧8-OHdG鸟苷酸(mouse 8-OHdG)  进口分装

CLIAKitforIL-10(RabbitIerleukin10)ELISAKit兔白介素10

通用型密执岁棍状杆菌(Clavibactermichiganensissubsp.michiganenesis;Cmm)试剂盒20次

ELISAKitVEGF-B大鼠血管内皮细胞生长因子B

小鼠膀胱抗原(BTA)试剂盒   96T/48T

小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)试剂盒   96T/48T

小鼠半胱酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)试剂盒   96T/48T

小鼠白血病抑制因子受体(LIFR)试剂盒   96T/48T

小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA 试剂盒 96T/48T

Human endotoxin (ET) ELISA Kit 人内毒素(ET)试剂盒

HumanαLactalbumin,α-LaELISAKit 人α乳清蛋白(α-La)试剂盒 96T/48T 进口分装

GoatTumornecrosisfactorα,TNF-α试剂盒山羊坏死因子α(TNF-α)试剂盒规格：96T/48T

真菌/酵母0脂酶D(PhospholipaseD)总活性荧光定量试剂盒20次

MouseClusterofdiffereiation19,CD19ELISAKit小鼠CD19分子(CD19)试剂盒规格：96T/48T

SH2B蛋白抗体

细胞死亡防卫蛋白1抗体

人原代肝实质细胞专用培养基CSF2重组大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 标签) Protein

cx3cl1(chemokine (C-X3-C motif 0.5mgcx3cl1(chemokine (C-X3-C motif) ligand 1) 趋化因子(C-X3-C 基元)配体1抗原

LGALS3重组人 Galectin-3 / LGALS3 蛋白 Protein

COLGALT2 Protein Human 重组人 GLT25D2 蛋白

VSIG4 Protein Mouse 重组小鼠 VSIG4 蛋白

?无菌操作?：细胞培养需在无菌环境下进行，使用前需对超净工作台进行紫外线照射灭菌，定期清洁培养箱。实验人员需更换工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材灭菌?：玻璃器皿、金属器械等可采用高压蒸汽灭菌，塑料制品则多选择环氧乙烷灭菌或购买已灭菌产物。

?试剂选择?：所用培养液、血清、缓冲液等试剂应无菌、无污染，使用前需进行无菌检测。不同细胞对培养液成分要求有差异，应按细胞类型选择合适培养液。

?培养条件?：多数哺乳动物细胞适宜培养温度为37℃，偏差应控制在&辫濒耻蝉尘苍;0.5℃。培养箱应保持良好密封性，定期检查气体浓度与流量，细胞培养通常需5%颁翱2以维持培养液辫贬值稳定。培养箱内湿度应保持在95%左右。

?日常观察?：每天在显微镜下观察细胞形态、生长状态与培养液颜色变化。

?定期检测?：定期对细胞进行支原体、细菌、真菌等污染检测。